尊龙凯时的类器官原代培养流程分为准备工作、操作流程和传代消化三个部分。下面将详细介绍每个环节。

一、准备工作

1. 仪器设备：需要CO2培养箱、双人单面超净台、倒置显微镜、台式冷冻离心机、水浴锅及医用冰箱等设施。2. 试剂耗材：（以肠癌为例）动物脑类器官培养基试剂盒（型号abs90050）、基质胶（低因子、无酚红）(abs9495)、细胞培养皿等。实验过程中需确保所有材料和工具的无菌状态，以保证实验结果的可靠性。各组分名称及规格如下： - 动物脑类器官培养基A：100mL - 类器官原代培养缓冲液B：250mL - 原代组织消化液C：30mL - 类器官传代消化液D：30mL - 组织保存液E：100mL - 类器官冻存液F：20mL - 类器官传代培养缓冲液G：250mL

二、操作流程

1. 样本准备： - 将组织放入预冷（2-8°C）的组织保存液E中（确保整个组织浸没），然后转移至4°C保存。 - 将取样瓶消毒后，取出组织并放入培养皿中拍照登记，记录其大小、颜色、软硬程度等信息。 2. 清洗和剪碎： - 在60mm细胞培养皿中使用2-3mL原代培养缓冲液B进行浸泡，清洗三次后，将组织剪碎至1-3mm³，转移至15mL离心管中。3. 消化和过滤： - 在离心管中加入5倍原代组织消化液C，37°C消化15-30分钟，观察消化情况。当细胞团显著增多时，加入3倍体积的培养缓冲液B以终止消化。 - 经过100μm滤筛过滤后，收集滤液，离心后移去上清。4. 加胶、点板和加液： - 准备基质胶并加冷，准备工作中保持低温以避免气泡形成。 - 将25μL基质胶与细胞团混合物点入24孔板中，随后加入500-750μL类器官培养基A进行培养。大约在10-14天内，类器官生长至200μm-500μm直径，可以进行后续的传代操作。

三、传代消化

1. 类器官收集及洗涤： - 移液器吸去培养基，添加4℃的类器官传代培养缓冲液G，轻柔吹散基质胶，然后进行离心收集细胞团沉淀。2. 类器官消化： - 添加类器官传代消化液D进行短暂消化，确保细胞团不会分散为单细胞。3. 加胶、点板和加液： - 将处理后的细胞团以适当比例与基质胶混合，点入培养板中，再进行培养。在适当的环境温度下生长预期的10-14天，实现成功的类器官传代。尊龙凯时致力于提供顶尖的科研工具及试剂，以促进生物科研的进步。如果您在实验过程中有任何疑问，欢迎随时与我们交流。