中文

English

细胞复苏失败原因解析——尊龙凯时生物医疗篇

发布时间:2025-02-09   信息来源:尊龙凯时官方编辑

细胞复苏的成功与否与冻存及复苏操作息息相关。上周我们讨论了细胞冻存中常见的错误,详细内容见《细胞复苏失败原因分析——冻存篇》。本篇将从复苏的角度分析,探讨复苏过程中可能出现的问题。

细胞复苏失败原因解析——尊龙凯时生物医疗篇

复苏步骤回顾

在了解复苏常见问题之前,我们先回顾一下复苏步骤:

  1. 提前将水浴锅预热至37℃,培养基复温,并设置好离心机转速。
  2. 准备一个15ml离心管并加入适量的培养基。
  3. 取出冻存管,迅速浸入水浴锅中并摇晃,使细胞在2分钟内充分融化。
  4. 将细胞悬液缓慢滴入预先添加培养基的离心管中,并以1000rpm离心3分钟。
  5. 弃去上清,重悬细胞并接种至培养器皿中,放入培养箱中。

复苏过程中的常见错误

以下是细胞复苏时可能出现的一些常见错误操作:

1. 运输中的细胞温控不足

如果液氮或冰箱距离水浴锅较远,且在运输中未采取保冷措施,细胞可能在路上开始融化(特别是在夏季)。冻存细胞应放置在干冰或冰盒中运输。

2. 接触冻存管时的误操作

在运输冻存管时,如果用手触碰到细胞部分或将其放在口袋里,会导致局部温度升高,从而引发细胞融化。应当捏住管盖或放在容器中运输。

3. 不当的融化方式

切忌用手捂化(搓热),因为手掌的温度不足以快速且均匀地升温,可能导致细胞因受到热量不均匀和降温速度过慢而死亡。

4. 水浴控制不当

水浴时如未严格控制时间,直接将冻存管静置于水中而不加摇晃,会造成细胞复苏效果差。遵循“快融”的原则,建议在2分钟内完成细胞的充分融化。

5. 结束时管内冰块未完全融化

若水浴结束时冻存管内还有较大冰块,这会影响细胞存活。一方面,冰块中的细胞缓慢升温而死亡;另一方面,冰块会对已融化的细胞造成低温损伤。如果觉得2分钟内难以融化细胞,可以将水浴锅温度调至39℃,适度增加摇晃速度。

6. 忽视DMSO的去除

部分同学在复苏细胞后,会直接用10倍培养基稀释而不离心去除DMSO。这种方式对于贴壁细胞可能有效,但对悬浮细胞却不适用,因此建议始终进行离心操作以去除DMSO,以确保细胞的存活。

以上内容基于小尚多年的经验总结,结合冻存篇,基本涵盖了所有可能导致复苏失败的关键问题。如有其它知识点未提及,欢迎同学们在评论区补充。

在细胞研究与医疗领域中,选择尊龙凯时意味着选择专业与品质,助您轻松实现细胞复苏的最佳效果。